Понятие о микробиоценозе. В обычных условиях в организме животных постоянно присутствует нормальная микрофлора. Микробиоценозы — сообщества микроорганизмов — формируются в естественных биотопах (нишах), которые контактируют с внешней средой (пищеварительная и мочеполовая система, легкие, кожа и т.д.). В микробиоценозах различают характерную для данного вида, или облигатную (резидентную), и случайную, или факультативную (транзиторную), микрофлору. В каждом биотопе формируются собственные особые условия для существования и взаимодействия населяющих его микроорганизмов, то есть видовой и количественный состав микрофлоры в разных биоценозах существенно различается. Поэтому и были введены такие понятия, как микроэкология кишечника, кожного покрова, гениталий, верхних дыхательных путей, полости рта и т.д.

Макроорганизм и совокупность микробиоценозов разных его биотопов составляют единую экологическую систему. Она способна к саморегуляции в постоянно изменяющихся условиях внешней среды. Эволюционно сложившиеся компенсаторные механизмы обеспечивают преобладание в микробиоценозах нормальной микрофлоры.

Кишечный микробиоценоз не только самый многочисленный и разнообразный по качественному составу, но и наиболее чувствительный к воздействию неблагоприятных факторов. Поэтому кишечный дисбактериоз нужно рассматривать как ранний сигнал начавшегося в организме дисбаланса. Поскольку кишечный микробиоценоз влияет на микробиальный состав других биотопов и физиологические функции организма животного или человека в целом, то особенно важно предупреждать развитие кишечного дисбактериоза, а также своевременно и эффективно его корректировать.

Облигатная (резидентная) микрофлора. Основу нормальной микрофлоры кишечника животных, в том числе и собак, составляют неспорообразующие облигатно-анаэробные микроорганизмы. Соотношение анаэробов и аэробов в тонком и толстом кишечнике собак в норме составляет примерно 1000 : 1 (табл. 1). Кишечный микробиоценоз взрослых здоровых собак (нормобиоз) характеризуется численным превосходством бифидобактерий и лактобактерий: суммарное количество до 90...95 % общего числа бактерий.

1. Качественный и количественный состав микрофлоры различных отделов ЖКТ здоровых собак 2...7-летнего возраста

Весьма важно, что они доминируют и по физиологической значимости для макроорганизма. Под действием слюны, кислоты, пепсина значительная часть транзиторной микрофлоры гибнет уже в желудке. В двенадцатиперстной, тощей, краниальной части подвздошной кишки рост микроорганизмов ограничен выбросом желчных кислот, ферментов кишечника и поджелудочной железы, активной перистальтикой, секрецией иммуноглобулинов (IgA, IgE). На этих участках доминируют бифидобактерий, лактобактерии, энтерококки, энтеробактерии, стрептококки, встречаются кандиды. В каудальной части подвздошной кишки и в толстом кишечнике микробиоценоз разнообразен и зависит от наличия трудноферментируемых пищевых волокон в кормах. Волокна представляют собой натуральный пребиотик — субстрат для нормальной микрофлоры. Кроме перечисленных выше здесь всегда имеются бактероиды, клостридии, эубактерии, фузобактерии, вейолонеллы, пептококки, пептострептококки, актиномицеты и др. В 1 г фецес в зависимости от влажности содержится до 10-10... 10-12 микробных клеток (15...30 % по массе).

Бифидобактерий. Эти грамположительные бактерии из рода Bifidobacterium — основной представитель нормальной микрофлоры кишечника мелких домашних животных и птиц (в норме в 1 г содержимого толстого кишечника в зависимости от возраста, типа кормления и др. их насчитывается до 1012). Эти анаэробы чувствительны к составу питательных сред и трудоемки в культивировании. Бифидобактерий не образуют спор, не выдерживают высоких температур, то есть гранулирования, им не требуется особых условий таблетирования. Но их роль в симбиотических отношениях с макроорганизмом очень важна. Выраженная способность к адгезии обеспечивает им прикрепление к поверхности слизистой оболочки кишечника, участие в пристеночном пищеварении, ферментации субстратов и конкуренции за пищевую нишу с другими представителями микрофлоры. Формируя биопленки на поверхности слизистой оболочки кишечника, бифидобактерий препятствуют размножению патогенных и условно-патогенных бактерий, что определяет колонизационную резистентность [19, 47]. Их антагонистическая активность связана с образованием ацетата, лактата, ЛЖК, лизоци-моподобных и других веществ с антибактериальной активностью. Бифидобактерий подавляют токсинообразование и разрушают токсины патогенных бактерий и кормов. Они используют аммиак в просвете кишечника для синтеза собственных структурных белков, существенно снижая токсическую нагрузку на печень [25].

Бифидобактерий — природные иммуномодуляторы. Они стимулируют пролиферацию лимфоидной ткани ЖКТ, усиливают фагоцитарную активность макрофагов, моноцитов, гранулоцитов, специфический гуморальный иммунитет, синтез цитокинов (у-ИФ, ИЛ-6, ФНО [18, 31, 41]. Влияние на обмен веществ определяется деконъюгацией желчных кислот, всех стероидов, что обеспечивает их многократную рециркуляцию. При снижении содержания би-фидофлоры желчные кислоты, стероидные гормоны теряются с фекалиями, что приводит к диарее, синдрому раздраженной толстой кишки (желчные кислоты обладают сильным местным раздражающим действием). Утрата стероидных соединений провоцирует развитие гормональной дисфункции, существенно снижает эффективность лекарственных препаратов, содержащих стероидные компоненты. Например, на фоне дисбактериоза неэффективны препараты на основе эстрогенов, андрогенов, прогестерона, так как действующее вещество теряется с фекалиями при первом прохождении кишечника. При уменьшении количества бифидоф-лоры изменяются водно-солевой, белковый, жировой, нуклеотид-ный, витаминный обмен, рН и анаэробиоз в кишечнике. Бифидобактерий продуцируют лизин, аргинин, валин, метионин, лейцин, тирозин, глютаминовую кислоту, витамины Вь В2, В6, В12, С, никотиновую, фолиевую кислоты и биотин, обеспечивают питание клеток толстой кишки—колоноцитов. При их дефиците снижается синтез витамина К, нарушается свертывание крови [23]. Под воздействием неблагоприятных факторов бифидофлора первой исчезает из ЖКТ [3, 62].

Сложность выбора эффективного прооиотика — донора бифидо-бактерий — связана с тем, что к роду Bifidobacterium в настоящее время отнесено 32 вида, различных по биохимическим, физиологическим, серологическим признакам, морфологии, виду животных, у которых они обитают. При видовой идентификации бифидобактерий у домашних животных и птицы выявлено, что преобладают виды В. adolescentis, В. globosum, В. termophilum. Нам не удалось выделить бифидобактерий вида В. bifidum, характерные для кишечника человека, которые часто используют для изготовления медицинских пробиотиков. Следовательно, предпочтительны качественные бифидосодержащие препараты ветеринарного назначения. Кроме того, бифидобактериями не могут быть обогащены гранулированные и консервированные готовые корма, так как эти микроорганизмы не выдерживают высокотемпературных обработок.

Лактобактерии (молочнокислые) бактерии. Это вторая по численности и значимости группа нормальной микрофлоры ЖКТ домашних животных, принадлежит к роду Lactobacterium [10, 14]. По мнению некоторых практикующих врачей, у взрослых собак, кошек, кроликов, морских свинок, а тем более у декоративных птиц лактобактерии не могут иметь существенного значения, так как эти животные во взрослом состоянии молоком не питаются. Это заблуждение (рис. 1), ведь свое название лактобактерии получили по способности продуцировать молочную кислоту, а не по субстрату. Напротив, эти бактерии играют очень большую роль. Они сдерживают рост и развитие псевдомонад, эшерихий, сальмонелл, шигелл, стрептококков, стафилококков, анаэробных бактерий, включая клостридий [30, 49]. Антагонистическая активность обусловлена синтезом органических кислот и бактериоцинов, которые фиксируются на специфических рецепторах возбудителей, изменяя структуру и проницаемость их клеточной стенки и вызывая в некоторых случаях ее лизис. Бактериоцины подавляют синтез микробного белка и ДНК, обладают противоопухолевым эффектом. Кроме того, лактобактерии продуцируют антимикробные вещества лантабиотики, которые малочувствительны к ферментам кишечника, а также низкомолекулярные органические соединения небелковой природы, которые активны в присутствии кислот или пероксида водорода.

Важнейший продукт метаболизма молочнокислых бактерий — пероксид водорода, бактерицидный эффект которого связан с окислением и разрушением клеточных белков аэробной флоры, что сдерживает ее численность. Усиление фагоцитарной активности макрофагов, захвата и катаболизма ими антигенов отмечено при пероральном, подкожном и интраперитонеальном введении живых лактобактерии, супернатантов, убитых культур и фрагментов их стенок. В условиях in vitro и in vivo молочнокислые бактерии стимулируют иммунитет, продукцию лизоцима, ИФ и ИЛ [19, 28]. Лактобактерии, как и бифидобактерий, активно участвуют в метаболизме, синтезе витаминов, аминов, биологически активных соединений.

К роду Lactobacterium к настоящему времени относят 44 основных вида. Еще 23 вида описаны, но таксономическое положение их точно не установлено. Большая часть штаммов лактобактерии, выделенных у домашних животных, отнесена к видам L. acidophilum, L. plantarum, L. helveticum [14, 22]. Способность к проявлению антагонистических и других свойств генетически детерминирована. Поэтому клиническая эффективность пробиотиков, включающих лактобактерии, зависит от выбора исходного варианта микроорганизма. Лактобактерии чувствительны к термической обработке.

Энтеробактерии. В норме основная часть энтеробактерий кишечника представлена эшерихиями. Если в пристеночном микробиоценозе доминируют лакто- и бифидобактерий, то эшерихий располагаются преимущественно в просвете и лишь отчасти примыкают к эпителию ворсин, активно участвуя в ферментативных процессах. Они продуцируют колицины, препятствуют росту других бактерий, в числе первых заселяют организм после рождения, доминируют у животных при снижении иммунитета, после облучения вызывают септицемию [36]. Этот вид имеет много серовариантов, различающихся по антигенной структуре, биохимической активности, степени патогенности. Непатогенные эшерихий могут быть включены в состав пробиотических препаратов [15].

Энтеропатогенные эшерихии — причина эшерихиоза (коли-бактериоза), который может протекать как сепсис, менингит, энцефалит, миелит, пиелонефрит, цистит, перитонит и т.д. Разнообразие клинических проявлений зависит как от возраста и резистентности макроорганизма, так и от вирулентности бактерий, их способности продуцировать токсические субстанции. У эшерихии широко представлены внехромосомные плазмиды, которые легко передаются как внутри собственной популяции, так и энтеробак-териям других видов, что ведет к распространению антибиотико-резистентности. В последнее время это стало серьезной проблемой. В ходе бактериологической диагностики нами установлено, что трудноподдающиеся лечению энтериты, простатиты, циститы у взрослых собак в г. Москве часто бывают вызваны гемолитическими штаммами эшерихии с очень высоким уровнем антибиотикорезистентности (2...3 активных препарата из 15...20 исследованных). У декоративных взрослых кроликов эшерихиозы могут протекать молниеносно с неожиданной гибелью животных в ночные часы. Патогенные штаммы эшерихии обладают адгезивностью к энтероцитам за счет поверхностных антигенов белковой природы [10]. Поэтому необходимым элементом как профилактики, так и лечения эшерихиозов является вытеснение возбудителей лакто- и бифидофлорой с восстановлением колонизационной резистентности, формируемой этими микроорганизмами.

Энтерококки. Представлены фекальными стрептококками, которых тоже относят к нормальной микрофлоре ЖКТ.

Фекальный энтерококк (Ent. faecium) — факультативный анаэроб, сохраняет активность и размножается в присутствии кислорода, не нуждается в условиях анаэробиоза, менее чувствителен к составу питательных сред, что упрощает его промышленное культивирование. Микроорганизм часто включают в состав пробиотиков и кормов, он широко распространен в природе (в фекалиях животных, птиц, человека, в почве и воде).

Антагонистическая активность связана с кислотообразующими свойствами, продукцией бактериоцинов, стимуляцией иммунокомпетентных клеток, образованием ИФ и ИЛ, активацией В-клеток, повышением синтеза IgA. Энтерококки в нормальном микробиоценозе кишечника человека и домашних животных составляют по численности третью или четвертую группу бактерий [12, 22]. Однако в медицине отмечена тревожная тенденция: резкое усиление патогенных свойств энтерококков на фоне роста их ферментативной активности и резистентности к антибиотикам. Способность вызывать гастроэнтериты, пневмонии, маститы, эндокардиты, менингиты, септицемию и другие заболевания привела к пересмотру бытовавших ранее взглядов о полной безопасности этих микроорганизмов. Более того, при миокардитах часто выявляют резистентные даже к ванкомицину формы энтерококков, что служит неблагоприятным прогностическим признаком (указывает на возможность смерти) в медицинских клиниках [21].

Бактероиды. Эта группа бактерий входит в состав нормальной микрофлоры ЖКТ, ротовой полости, верхних дыхательных путей, мочеполовых органов. Род Bacteroides включает в себя более 20 видов. В кислой среде бактероиды проявляют антагонизм по отношению к сальмонеллам, эшерихиям, другим микроорганизмам, играют существенную роль в колонизационной резистентности, в том числе и за счет синтеза бактериоцинов. Но недавние исследования свидетельствуют о возможности их участия в патологических процессах (энтеритах, некротических гепатитах, перитонитах, менингитах). Синергизм при развитии инфекционных процессов отмечен в отношении боррелий, микоплазм, стрептококков, стафилококков, пастерелл [13, 42].

Клостридии. В ЖКТ животных и человека всегда обнаруживают клостридий (до 35 видов). Их характерная особенность — способность к сапрофитному существованию в почве, ЖКТ человека и животных. Есть данные литературы о синтезе ими витаминов: никотиновой, фолиевой, пантотеновой кислот, рибофлавина. Считают, что отдельные виды клостридий являются наиболее древней регуляторной системой микроэкологии человека и животных [23]. Но клостридии могут стать и причиной заболеваний: на фоне гибели нормальной флоры при доминировании токсинообразующих клостридий развивается псевдомембранозный энтероколит, который часто заканчивается летально. Обычно такое состояние возникает после лечения антибиотиками (возможно через 7... 14 дней после окончания их применения).

Грибы. В состав нормальной флоры, заселяющей слизистые оболочки ЖКТ и респираторного аппарата, половых органов и кожи, всегда входят дрожжеподобные грибы рода Candida, которых насчитывается более 80 видов. Их относят к условно-патогенным микроорганизмам. При снижении общей или колонизационной резистентности макроорганизма развиваются кандидамико-зы, причем микроорганизмы могут проникать в организм хозяина через слизистые оболочки ЖКТ, поступать в кровь, а их эндотоксины вызывают поражение паренхиматозных органов.

Кишечный микробиоценоз — сложная экосистема, включающая в себя более 400 видов микроорганизмов [1, 23]. Изменения в этой ассоциации при неконтролируемом внесении отдельных микроорганизмов могут иметь непредсказуемые последствия и остаются недостаточно изученными. Перечисленные выше группы микроорганизмов составляют основную часть резидентной микрофлоры ЖКТ животных и птиц, причем только для бифидо- и лактобактерий прямое или косвенное участие в патологических процессах не установлено.

Факультативная (транзиторная) микрофлора. Кроме резидентной микрофлоры в ЖКТ встречаются транзиторные микроорганизмы. Среди них могут быть как сапрофиты, так и паразиты, способные вызывать тот или иной патологический процесс.

Бациллы. Это спорообразующие палочковидные бактерии рода Bacillus, большая часть которых является аэробами. В кишечнике чаще всего встречаются В. subtilis (сенная палочка), В. cereus, реже другие виды. Бациллы широко распространены в окружающей среде. В ЖКТ постоянно поступают преимущественно с растительной пищей, а их споры — с кормами, прошедшими термическую обработку. Обладают выраженными протеолитическими свойствами, являются активными антагонистами и природными источниками большого числа антибиотических субстанций.

Стафилококки. Эпидермальный (Staph. epidermidis) — условно-патогенный вид — и сапрофитный (Staph. saprophiticus) стафилококки относятся к постоянным обитателям кожного покрова животных; в ЖКТ попадают постоянно при вылизывании кожи и шерсти. Патогенный вид стафилококка (Staph. aureus) из фекалий здоровых животных практически не высевается.

Многие представители транзиторной флоры — клебсиеллы, псевдомонасы, протей, стафилококки, спирохеты, цитробактеры, энтеробактеры, плесневые грибы и др. — на фоне пониженной колонизационной резистентности или ослабления общей иммуноре-активности организма могут избыточно размножаться в ЖКТ и вызывать заболевания [12, 38].

В последние годы большие успехи достигнуты в изучении микробных популяций, образующих биопленки, зоогели, флоки. Им свойствен бактериальный альтруизм: при недостатке питательных веществ часть популяции гибнет в результате апоптоза. За счет структурных компонентов погибших клеток питается оставшаяся часть популяции, что и обеспечивает ее жизнеспособность. Важная особенность — наличие у микроорганизмов «биологических часов», которые зависят от плотности клеточной популяции. По мере развития колоний образуются и накапливаются сигнальные молекулы, что обеспечивает синхронизацию поведения отдельных клеток [2]. Именно за счет накопления сигнальных молекул грамотрицательные бактерии (в том числе Salmonella и Е. coli) периодически формируют клетки-швермеры. Последние имеют жгутики, способны к центробежной миграции, что и приводит к генерализации патологического процесса. Существует генетический триггер, переключающий клетки с синтеза белков поздних стадий клеточного деления на синтез белка жгутиков (флагеллина) и таким образом детерминирующий взаимопревращение швермеров и делящихся вегетативных клеток [53, 55]. Происходит чередование нескольких процессов: рост и деление вегетативных клеток (латентная фаза перед очередным формированием швермеров); массовое формирование центробежно мигрирующих швермеров; превращение швермеров в вегетативные клетки с образованием очередной террасы (стадия консолидации). Интересен тот факт, что по агару, не занятому растущей колонией, могут перемещаться только группы швермеров. Одиночные клетки, вышедшие за пределы колонии, теряют подвижность, если их не «подхватит» та или иная группа швермеров [53]. Такая коллективная форма взаимовлияния микробных клеток характеризуется термином «эффект кворума» и регулирует дифференцировку клеток, образование структур надколониального уровня типа внеклеточного матрикса [2, 48]. Многие биологически активные вещества, продуцируемые микробными популяциями, гомологичны биологически активным веществам, гормонам и гистогормонам высших животных [2, 46, 57, 58].

Эффект кворума микроорганизмов, в том числе патогенных, имеет важное значение в понимании закономерности действия антимикробных препаратов [32, 35, 58]. В результате применения антибиотиков патогенные бактерии могут получать мутацию по важным для онтогенеза признакам, что обеспечивает химиотерапевтический эффект. Описано, что мутант Е. coli с поврежденным антибиотиком геном ДНК-полимеразы I в первые часы после применения антибиотика формирует аномальные микроколонии из нитевидных клеток. Но исследования показали: если рядом находятся зрелые нормальные колонии патогенного микроорганизма, то они выделяют диффундирующие химические факторы коммуникации. Под их воздействием мутантные микроорганизмы находят пути преодоления дефекта и через ряд пассажей становятся морфологически и функционально не отличимыми от обычных. Взрослые колонии заставляют молодые быстро приобретать признаки зрелости [55]. Поэтому так важно, чтобы в кишечнике домашних животных, как и у человека, преобладала нормальная микрофлора, что является одним из важнейших условий нормального роста, развития, долголетия [64].

На количественное разнообразие, соотношение в микробиоценозе резидентной и транзиторной микрофлоры влияют возраст, тип кормления, факторы внешней среды, наличие заболеваний, применение лекарственных препаратов. Если внешние воздействия (химиотерапевтические препараты, пестициды, токсины, стрессы, вирулентные микроорганизмы и т.д.) по интенсивности превышают компенсаторные механизмы, то в микробиоценозах начинает преобладать транзиторная микрофлора, что ведет к развитию дисбак-териозов [1, 3]. Таким образом, макроорганизм и населяющая его микрофлора — это взаимозависимые части единой системы, что с экологических позиций служит проявлением симбиоза с его различными формами (комменсализм, мутуализм, паразитизм и т.п.). Конкурентно-антагонистические свойства нормальной микрофлоры играют важную роль в функционировании единой экологической системы животный организм — окружающая его среда.

Глава 2

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА

Бактериальная флора ЖКТ необходима для нормального развития макроорганизма: результаты исследований в области клинической физиологии микробиоценоза кишечника доказывают ее широчайшее участие в процессе пищеварения, обмене веществ, а также значение ее нарушений в формировании многих патологических состояний.

Нормофлора ЖКТ проявляет антагонизм по отношению к патогенной и условно-патогенной микрофлоре, что обеспечивает колонизационную резистентность. Механизмы реализации этого важного свойства разнообразны. Один из них — нормальная (резидентная) микрофлора способна находиться в тесном контакте со структурами кишечной поверхности, что обеспечивает конкуренцию с другими бактериями за место связывания на энтероцитах. На поверхности слизистой оболочки кишечника формируется защитная микропленка, состоящая из представителей нормофлоры, образуемых ими экзополисахаридных комплексов, а также гликокаликса и муцина энтероцитов [1, 14, 23, 24, 42, 44].

Нормофлора ЖКТ влияет на формирование местного иммунитета слизистой оболочки кишечника, прежде всего толстой кишки. Она ингибирует адгезию патогенных бактерий к слизистой оболочке кишечника. Клинико-экспериментальными исследованиями установлено, что снижение количества нормальной микрофлоры в толстой кишке влечет за собой стремительное уменьшение численности клеток, продуцирующих IgA, который активно участвует в местном иммунитете. При этом продемонстрировано, что содержание в плазме крови общего белка, а-, р- и у-глобулинов как у безмикробных животных, так и у больных с дефицитными формами дисбактериоза кишечника ниже нормы [49, 52]. При недостатке в бактериальном спектре толстой кишки бифидобакте-рий даже при нормальном фагоцитозе у микро- и макрофагов гидролиз ими антигенов замедляется. Стимуляция активности макрофагов, иммунокомпетентных структур слизистой кишечника особенно важна в первые месяцы жизни [8, 19, 26, 38, 41].

Нормофлора ЖКТ стимулирует продукцию ИФ, цитокжов, лизоцима, пропердина — активных регуляторных участников реакций иммунного ответа. Микрофлора кишечника синтезирует ряд биологически активных веществ, способствующих разрушению аллергенов, участвует в феномене «взаимной молекулярной мимикрии»: бактерии приобретают рецепторы и некоторые другие антигенные свойства, присущие эпителиоцитам слизистой оболочки кишки, а эпителий кишечника приобретает бактериальные антигены. Это повышает эффективность целого ряда механизмов местной иммунной защиты [11, 38, 49, 56, 60].

Нормофлора ЖКТ стимулирует пролиферацию плазматических клеток и гуморальные иммунные реакции. У безмикробных животных в сыворотке крови значительно меньше содержится IgG, в кишечнике отсутствуют плазматические клетки, продуцирующие IgA, снижены активность супрессорных макрофагов, естественных киллеров, образование антител в ответ на стимуляцию антигенами. Захват антигенов в толстом кишечнике ведет к миграции иммунокомпетентных лимфоцитов в другие ткани, в том числе в респираторную систему, урогенитальный тракт, то есть обеспечивает профилактику заболеваний не только пищеварительной, но и других систем [19, 45, 60]. Иммуномодулирующие свойства обнаружены у бактериальных липополисахаридов, полисахаридов, белков, пептидов и их комплексов с различными веществами и метаболитами [9, 27, 28, 29, 41, 51].

Фрагменты клеточных стенок грамположительных бактерий (пептидогликаны) регулируют иммунный статус хозяина, оказывают адъювантный, митогенный эффект, активируют комплемент, индуцируют выработку специфических антител [18, 60]. При доминировании условно-патогенных грамотрицатедьных бактерий, их логарифмическом росте либо при массивной гибели из-за воздействия антибиотиков или недостатка необходимых питательных компонентов Л ПС клеточной стенки высвобождаются. Они оказывают широкий спектр биологического действия на организм хозяина, многие из них в больших дозах токсичны, и их рассматривают как эндотоксины грамотрицательных бактерий [11,25,27,42].

Кроме механизмов местного иммунитета, регулирующих микрофлору кишечника, предупреждать рост определенных популяций патогенной микрофлоры могут продуцируемые нормальной микрофлорой вещества с антагонистическими свойствами. Молочнокислые бактерии образуют бактериоцины — белки с низкой молекулярной массой, которые, как правило, активны в кислой среде и характеризуются узким спектром действия. Они могут быть чувствительными или устойчивыми к нагреванию [14, 23, 41]. Бифидобактерии, бактероиды продуцируют антимикробные субстанции [13, 18, 25, 31, 64]. Эшерихии образуют колицины, энтеробактерии — микроцины (пептидные антибиотики с низкой молекулярной массой и широким спектром антимикробной активности). Представители рода Bacillus активно продуцируют антибиотики. В фармацевтической промышленности на их основе производят такие препараты, как полимиксины, бацитрацин, грамицидин, субтилин, бутирозин, тироцидин. Обычно они устойчивы к действию пептидаз и протеаз животного и растительного происхождения, а также кислот [8, 18, 20].

Микроорганизмы ЖКТ продуцируют большое количество других разнообразных по химическому составу соединений, проявляющих антимикробную активность: летучие и другие органические кислоты, пероксид водорода, диацетил. Лактобактерии, энтерококки, бациллы, бифидобактерии, другие микроорганизмы продуцируют лизоцим и подобные ему субстанции. Лизоцим проявляет антимикробный эффект за счет расщепления пептидогликанов грамположительных бактерий [8].

Колонизационная резистентность также ограничивает размножение представителей кишечной микрофлоры вне мест их обитания. При снижении колонизационной резистентности нарушается равновесие качественного и количественного состава микробиоценоза. Увеличивается рост отдельных популяций микроорганизмов, которые колонизируют кожный и слизистый покровы, расширяется ареал распространения условно-патогенной микрофлоры, включая транслокацию во внутренние органы, что вызывает гнойно-воспалительные процессы, септицемию. Усиливается передача факторов антибиотикорезистентности и патогенности между сообществами бактерий. Нормальная микрофлора хозяина способна блокировать инфекционный процесс, но ее дисбаланс может быть причиной заболеваний, источником секунд арных инфекций. Микрофлора ЖКТ существенно влияет на микробиоценоз остальных биотопов [ 1, 12, 26, 32, 41].

Нормофлора кишечника существенно влияет на структурные и функциональные характеристики кишечника и других органов. У безмикробных животных на 10...30 % меньше общая поверхность кишечника, тоньше собственная пластина стенки тонкой кишки, процесс обновления энтероцитов замедлен, снижена митотическая активность в криптах. Длина подвздошной кишки у них меньше, слепой — резко увеличена. При тяжелых формах дисбак-териоза отмечены гиперпластические процессы в слизистой оболочке толстой кишки, нередко переходящие в онкологические заболевания [25, 29, 36].

Нормофлора кишечника служит важным звеном в процессах пищеварения и метаболизма. Бифидобактерии, бактероиды, пептострептококки, клостридии образуют большое количество ферментов, которые участвуют в процессах пищеварения. Они преобразуют пектины и другие сложные углеводы с синтезом Сахаров, аминокислот, минеральных веществ, органических кислот: молочной, уксусной, пропионовой, в меньшей степени масляной, янтарной и муравьиной. Известно, что ЛЖК оказывают антимикробное действие и активно участвуют в регуляции микробиоценоза пищеварительного тракта, улучшают абсорбцию натрия, калия, хлора и воды, активно поддерживают водный, электролитный, кислотно-основной баланс макроорганизма. Двухвалентные ионы кальция, магния, цинка, железа, меди, соединяясь с молочной кислотой, образуют растворимый лактат — соединение, оптимальное для всасывания в кишечнике. ЛЖК обеспечивают энергией клетки слизистой толстой кишки, а у жвачных животных — до 70 % потребности в энергии [30, 34, 37, 39]. За счет продуцируемых микрофлорой ЛЖК и бикарбоната поддерживаются анаэробиоз в ЖКТ и рН химуса. Микроорганизмы ЖКТ (в первую очередь бифидо- и лактобактерии, бактероиды) активно синтезируют белок. В качестве субстратов они используют аммиак, диоксид углерода, органические кислоты. В результате лизиса бактерий под действием лизоцима, трипсина и других ферментов в кишечнике высвобождается большое количество аминокислот и субстанций, включающихся в обмен макроорганизма. Облигатные и факультативные анаэробы с помощью внеклеточных бактериальных липаз участвуют в гидролизе липидов. Из ацетата они образуют длинно-цепочечные жирные кислоты, в том числе пальмитиновую. У бифидобактерии, бактероидов, других анаэробов установлена эндонуклеазная активность, обеспечивающая метаболизм нуклеиновых кислот слущенных энтероцитов и лизированных микроорганизмов [43, 47].

У безмикробных животных в содержимом слепой кишки снижено количество хлоридов и бикарбоната. Способность к всасыванию воды и ионов у них уменьшена вследствие того, что в кишечнике накапливаются осмотически активные вещества, муцин. Это значительно увеличивает объем фекальных масс и снижает диурез. В норме бифидобактерии, фузиформные бактерии, бактероиды, стрептококки обеспечивают биодеградацию муцина, используют его в качестве источника энергии [3, 29, 37, 40, 44].

Газообразные продукты микробного метаболизма используются в пластических процессах микроорганизмов и хозяина, стимулируют моторику, выделяются во внешнюю среду с воздухом и фекалиями. Образование газов в ЖКТ зависит от состава микрофлоры и характера рациона. При нарушениях микроэкологии кишечника появляется флутуленция (образование газов с неприятным запахом), изменяется пассаж содержимого: возникают запоры либо диспептический синдром. Летучие соединения, образующиеся в результате жизнедеятельности микрофлоры ЖКТ, кожи и слизистых, важны для поведенческих реакций животных [3, 26, 29].

Нормофлора ЖКТ участвует в нейтрализации токсинов эндогенного и экзогенного происхождения: инактивации гистамина, продуктов белкового обмена (индола, скатола, фенола), что предохраняет слизистую оболочку кишечника от воспалительно-дистрофических изменений, подавляет гиперпластические процессы, лежащие в основе канцерогенеза. Благодаря широкому спектру ферментативной активности нормофлора ЖКТ способна к гидролизу гликозидов, глюкуронидов, сульфаматов, амидов, нитратов, эфиров, биодеградации различных токсических соединений, включая микотоксины [26, 33, 42].

Нормофлора ЖКТ обеспечивает биотрансформацию и кишечно-печеночную рециркуляцию многих биологически активных соединений и гормонов. При участии бактерий родов Bifldobacterium, Lactobacillus, Streptococcus, Bacteroides, Clostridium, Eubacterium осуществляется деконъюгация желчных кислот с образованием свободных желчных кислот, глицина и таурина, которые затем реабсорбируются [61, 63]. Эстрогены, гестагены, кортикостероиды, андрогены экскретируются с желчью в виде конъюгатов с глюкуроновой кислотой или сульфатом [57]. В толстом кишечнике они подвергаются гидролизу под действием ферментов лактобактерий, эубактерий, энтерококков, бактероидов, клостридий и некоторых других микроорганизмов. Высвобождающиеся гормоны подвергаются обратному всасыванию. Микробная трансформация и реабсорбция через печеночную вену характерны для желчных пигментов, фолиевой кислоты, витамина В12, протопорфирина, метаболитов витамина D и т.д. Холестерин метаболизируется кишечными бактериями до копростанола, копростанона, холестенона [24, 27,41, 43, 46, 54, 56].

Нормофлора ЖКТ продуцирует разнообразные физиологически активные субстанции, гормоноподобные соединения, медиаторы, контролирующие пищеварение и обмен веществ организма хозяина [24, 27, 32, 46]. Она синтезирует тиамин, рибофлавин, пиридоксин, никотиновую, фолиевую, пантотеновую кислоты, биотин, цианокобаламин, витамин К. Витамин BJ2 (цианокобаламин) синтезируется только микроорганизмами (пропионовокислыми бактериями, эубактериями, битурибактериями и некоторыми другими), причем наиболее интенсивно в анаэробных условиях у моногастричных животных в толстом кишечнике [24, 61, 63]. При недостатке цианокобаламина на фоне дисбактериозов могут -возникать гематологические, неврологические нарушения. У безмикробных животных нарушен гемопоэз, уменьшено число лейкоцитов и лимфоцитов в крови, изменены размеры и функция надпочечников, поджелудочной, щитовидной железы, яичников, гипофиза, концентрации инсулина и гастрина в плазме и тканях снижены [57]. У безмикробных мышей уменьшена продолжительность жизни, снижена репродуктивная способность [10, 24].

Имеются сообщения об образовании кишечными микроорганизмами активаторов и ингибиторов трипсина, щелочной и кислой фосфатаз, у-аминомасляной, изовалериановой кислот, аноректической субстанции [57, 61, 63, 64], брадикардина, простагландинов, серотонина, гистамина, других биологически активных соединений [23, 64]. Они влияют как на нейромышечную регуляцию кишечника, так и на центральную и вегетативную нервную систему животных и человека. Пищеварительный тракт по содержанию регуляторных аминов, пептидов и нейропептидов стоит на втором месте после ЦНС [2, 23]. Доказано участие микрофлоры различных биотопов организма в патогенезе аллергических состояний [23, 43, 49].

Среди множества функций нормальной микрофлоры можно выделить наиболее значимые с точки зрения физиологии:

• кишечный микробиоценоз — один из неотъемлемых компонентов пищеварения. Он функционально связан с ферментативным гидролизом корма. Расстройства данного механизма в определенной степени снижают эффективность пищеварения, неблагоприятно отражаются на многих сторонах метаболизма;

• микробиоценоз кишечника следует рассматривать как один из важных местных регуляторных механизмов морфофункциональной целостности и адаптационно-компенсаторной реактивности ЖКТ. Развитие дисбактериоза супрессирует, а в тяжелых случаях выключает или извращает регенерацию, кишечную проницаемость, всасывание, синхронизацию моторно-эвакуаторной деятельности, инициируя клинические проявления патологических состояний;

• регуляторная роль бактериальной флоры кишечника выходит далеко за пределы ЖКТ. Ее участие в синтезе и рециркуляции большого спектра гормонов, биологически активных веществ определяет влияние кишечного микробиоценоза на многие органы и системы целостного организма. Велика и важна патогенетическая значимость кишечных дисбиотических процессов в возникновении и прогрессировании внекишечных функциональных и даже вторичных органических нарушений;

• кишечная бактериальная флора представляет собой важнейший элемент защиты организма. Ее влияние распространяется не только на все функциональные и анатомические зоны ЖКТ (конкуренция с патогенной микрофлорой, угнетение гиперпластических тканевых процессов, инактивация токсичных веществ в кишечнике и многие другие), но и на организм в целом за счет прямого и опосредованного участия в иммуногенезе, биодеградации и выведении из организма токсикантов экзо- и эндогенного происхождения.

Расстройство функций микрофлоры, наблюдаемое при развитии кишечного дисбактериоза, формирует различные по степени тяжести субклинические и клинические патологические процессы, снижает протективную способность слизистой оболочки кишечника ко многим факторам экзо- и эндогенной агрессии.

Глава 3

ВОЗРАСТНЫЕ КОЛЕБАНИЯ КИШЕЧНОГО МИКРОБИОЦЕНОЗА

Микробиоценоз фецес был изучен у клинически здоровых щенков в возрасте 1...30 дней (из разных пометов, полученных от самок без гинекологической и другой патологии, имевших нормальные условия содержания и кормления), 1...6 мес, 7... 12 мес, а также у взрослых собак без признаков патологии в возрасте 1...5лет, 6...10 и старше Шлет. Бактерии идентифицировали в соответствии с классификационной системой Берджи (1984).

Уже в 1-е сутки жизни у 100 % щенков в фецес были обнаружены эшерихии, у!5% — энтерококки, лишь у 58,3 % — лактобактерии. К 5-м суткам спектр микроорганизмов расширился (табл. 2). Кроме вышеперечисленных микроорганизмов у 83,3 % животных высевали бифидобактерии (5,36 ±0,812 lg/r), у 41,7 % — дрожжи и плесени (1,59 ± 0,063 lg/r). В этом возрасте у щенков преобладали эшерихии и энтерококки (обнаружены у 100 % животных: 8,34 ±0,759 lg/r и 7,19 ±0,396 lg/r соответственно). Из всех проб фецес удалось выделить и лактобактерии (6,27 ± 0,430 lg/r).

С 10-дневного возраста бифидо- и лактобактерии, эшерихии и энтерококки были выявлены у 100 % щенят, причем количество указанных групп бактерий увеличилось до 7,14±0,405 lg/r и 6,82+0,581 lg/r соответственно, в то время как содержание эшерихии и энтерококков уменьшилось. Дрожжи и плесени высевали у 58,3 % здоровых щенят в возрасте 10 дней (2,53+0,392 lg/r). Кроме того, у 41,7 % животных были выделены лактозонегативные энтеробактерии (не относящиеся к роду Proteus) — (2,0+0,30 lg/r), у 75 % — аэробные бациллы (2,26±0,37 lg/r), у 33,3 % — стафилококки (1,72+0,135 lg/r). Следовательно, в этот период у щенков микробиоценоз ЖКТ богат и представлен бактериями разных родов.

Увеличение числа лакто- и бифидобактерий имеет важнейшее физиологическое значение. За счет адгезивных свойств и специфических рецепторов эпителиальных клеток кишечника эти бактерии формируют биопленку на поверхности слизистых оболочек, предотвращая прикрепление посторонних микроорганизмов. Антагонистическая активность лакто- и бифидобактерий коррелирует со способностью формировать хорошо выраженный гликокаликс (содержащую полисахариды структуру, располагающуюся вне бактериальной клетки и служащую аттрактантом разнообразных органических и неорганических соединений за счет ионного обмена) [29].

С 10-х по 15-е сутки у щенков отмечали дальнейший рост числа бифидо- и лактобактерий до 7,30 + 0,641 lg/r и 7,04 ± 0,833 lg/r соответственно. Количество эшерихий и энтерококков продолжало снижаться и составило к 15-дневному возрасту 7,63 ± 0,460 lg/r и 6,37 ±0,519 lg/r соответственно. Число лактозонегативных энте-робактерий практически не изменилось. Незначительно увеличилось число аэробных бацилл (2,81 ±0,185 lg/r у 83,3 % животных). Частота обнаружения в фекалиях стафилококков возросла до 50 %, но они высевались в небольших количествах (1,94 ± 0,204 lg/r). Дрожжи и плесени с 15-дневного возраста выделяли у 100 % животных в количестве 2,37 ± 0,272 lg/r.

К 20...25-дневному возрасту количественный и качественный состав микрофлоры фекалий щенков практически стабилизировался. Число бифидобактерий к этому возрасту составило 8,62 ± 0,495 lg/r, лактобактерий — 7,35 ± 0,762 lg/r, эшерихий — 7,36 ± 0,602 lg/r, энтерококков — 6,52 lg/r. Число высеваемых лактозонегативных энтеробактерий, аэробных бацилл, стафилококков, дрожжей и плесеней в этом возрасте по сравнению с 15-дневным существенно не изменилось.

Следует отметить, что сам факт выявления стафилококков и грибов в фецес без дальнейшего их типирования не служит основанием для постановки диагноза на стафилококкоз или микоз и назначения химиотерапевтических препаратов. Представители нормальной микрофлоры, формируя колонизационную резистентность, препятствуют чрезмерному размножению этих и других представителей патогенной и условно-патогенной групп. Нормальный кишечный микробиоценоз, характеризующийся преобладанием бифидо- и лактобактерий, окончательно устанавливается у щенков в нормальных условиях лишь к 20...25-дневному возрасту. До этого времени в кишечнике преобладают эшерихий, энтерококки и другие аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, которые не способны эффективно выполнять многие физиологические функции, в том числе обеспечивать надежную колонизационную резистентность. Фактически можно говорить о том, что первые 3 нед жизни у щенков наблюдают «естественный дисбактериоз», связанный с особенностями становления кишечной микрофлоры. Данные по изменению состава кишечной микрофлоры у клинически здоровых собак последующих возрастов приведены в таблице 3.

В возрасте от 1 до 6 мес у щенков преобладали бифидобактерий (9,04 ± 0,638 lg/r), вторыми по численности были лактобактерий (8,38 ±0,539 lg/r), третьими — эшерихий (7,89 ± 0,451 lg/r), четвертыми — энтерококки (7,59 ± 0,451 lg/r). У всех животных этой возрастной группы обнаружили аэробные бациллы (4,18 ± 0,613 lg/r), дрожжи и плесени (3,69 ± 0,817 lg/r). У 42,9 % выделяли лактозонегативные энтеробактерий (4,7 ± 15,32 % общего числа энтеробактерий), у 14,3 % — грибы рода Candida (1,85 lg/r), а у 28,6 % — стафилококки (3,18 ± 0,572 lg/r).

У собак 7... 12-месячного возраста существенных отличий в качественном и количественном составе микрофлоры фекалий по сравнению с 1...6-месячными животными не наблюдали. В 1...5-летнем возрасте соотношение и количество бифидо-, лактобактерий, эшерихий, энтерококков, аэробных бацилл, дрожжей, плесеней оставалось близким к показателям предыдущих возрастных групп. Однако к 5 годам у 27,3 % животных были обнаружены эшерихий со слабой лактазной активностью (5,7 ± 10,61 % общего числа эшерихий), а у 9,1 % — гемолитические эшерихий (5 % их общего числа). В 27,3 % случаев выделены бактерии рода Proteus (1,05 ± 0,031 lg/r). Частота обнаружения грибов рода Candida возросла до 54,5 % при абсолютном их количестве 3,61 ± 0,443 lg/r фекалий.

В группах животных от 6 до 10 лет и старше прослеживалась тенденция к уменьшению числа бифидо- и лактобактерий до 8,04 ± 0,481...7,11 ± 0,617 lg/r и 7,45 ± 0,615...6,67 ± 0,744 lg/r соответственно. Вместе с тем увеличивалось количество эшерихий до 8,08 ± 0,805 и 8,54 ± 0,649 lg/r соответственно. Следовательно, у 6... 10-летних собак количество бифидо- и лактобактерий примерно равно количеству эшерихий, а у животных старше 10 лет эшерихий, как и в первые недели жизни, начинают преобладать в толстом отделе кишечника. При этом у 60 % собак в возрасте 6... 10 лет и у 100 % в возрасте старше 10 лет обнаружены эшерихий со слабой лактазной активностью (соответственно 9,4 ± 17,15 % и 12,6 ± 24,38 % общего числа эшерихий). Аналогичную тенденцию наблюдали и при исследовании лактозонегативных энтеробактерий (15,4 ±46,66...16,0 ± 7,8%). У 60...66,7% животных данных возрастных групп выделяли бактерии рода Proteus (1,08 ± 0,027... 1,53 ± 0,045 lg/r). Увеличилось и количество высеваемых спорообразующих аэробных бактерий (4,42 ± 0,536... 4,78 ± 0,728 lg/r), стафилококков (3,90 ± 0,292...4,57 ± 0,386 lg/r), дрожжей и плесеней (3,39 ± 0,520...4,52 ± 0,635 lg/r).

Таким образом, у собак с возрастом снижается число лакто- и бифидобактерий, которые перестают преобладать в кишечном микробиоценозе. Указанную тенденцию начинают наблюдать с 5...6 лет, что совпадает с началом возрастных изменений, в том числе в гормональной регуляции, и отчетливо выявляется у всех собак в возрасте 10 лет и старше.

Первым критическим периодом у собак с точки зрения возможного развития дисбактериоза является возраст до 30 суток. У здоровых самок плоды в матке не контаминированы микроорганизмами до начала родов. Первую порцию микрофлоры плод получает при прохождении через родовые пути, и это играет роль эволюционно закрепленной расплодки. Микрофлора родовых путей здоровых самок во многом сходна с таковой в ЖКТ (в норме преобладают лакто- и бифидобактерий, обнаруживаются энтерококки, стафилококки, реже и в меньшем количестве — энтеробактерии). Источниками микроорганизмов для новорожденных щенков служат также шерстный покров, кожа матери и окружающие предметы, так как все это они активно облизывают после появления сосательного рефлекса. Бифидобактерий высеваются из фецес новорожденных щенков несколько позже других микроорганизмов и доминируют лишь с 20-х суток (рис. 2). Подобные закономерности выявлены нами у других животных, а также описаны у человека [3].

Бифидобактерии менее устойчивы во внешней среде, у них более длительный период роста и адаптации в кишечнике. Резервуар бифидобактерии — только родовые пути матери и ее кишечник, в то время как другие микроорганизмы, включая условно-патогенные, могут длительно сохранять жизнеспособность в присутствии кислорода во внешней среде, на коже и шерсти животных. При плохих санитарных условиях именно они в большом количестве попадают в организм новорожденных.

Так как бифидобактерии — строгие анаэробы, то они начинают расти только при достаточно низком окислительно-восстановительном потенциале среды. Считают, что более раннее заселение факультативных анаэробов, в частности лактобактерий, способствует связыванию определенных количеств кислорода, что создает благоприятные условия для роста бифидофлоры [47].

Почему в норме бифидобактерии и в дальнейшем преобладают? Один из важнейших факторов в контроле численности и состава бактериальных популяций — конкуренция за питательные субстраты, которые могут быть использованы при низком окислительно-восстановительном потенциале кишечника в присутствии метаболических ингибиторов, образуемых микроорганизмами. Важно, что благодаря ферментам бифидобактерии легко и быстро используют полисахаридно-белковые компоненты слизи, образуемой бокаловидными клетками кишечника. Это создает для них преимущество, так как большая часть условно-патогенных и патогенных микроорганизмов такой способности лишена [44, 45]. Именно поэтому бифидобактерии размножаются в пристеночном слое нижних отделов кишечника, обеспечивая колонизационную резистентность [31, 47]. Они легко используют низкомолекулярные гликопротеиды, подавляя рост и размножение многих клостридий, для которых эти субстраты служат основным источником энергии. Один из факторов, предотвращающих колонизацию кишечника сальмонеллами, — низкая способность последних к конкуренции с представителями нормальной флоры за аргинин, серин, треонин и аспарагиновую кислоту [31, 44, 45]. Впоследствии пребиотиками (субстратами) для нормальной микрофлоры становятся трудноферментируемые волокна кормов (пектины, гликозаминогликаны хрящей, фрагменты клеточных оболочек и др.).

Важно, что нормальная анаэробная микрофлора в процессе метаболизма образует в просвете кишечника большое количество короткоцепочечных кислот. Лакто- и бифидобактерии — сахаро-литические микроорганизмы и получают энергию сбраживанием углеводов. Однако этот процесс у них протекает своеобразно. Только группа бифидобактерии преобразует глюкозу фруктозо-6-фосфатным путем. Основными продуктами метаболизма служат уксусная и L+ изомер молочной кислоты в соотношении 3:2. Образование уксусной и молочной кислот в примембранном слое кишечника — один из основных факторов антагонистической активности бифидофлоры. Эти кислоты легко проникают внутрь бактерий, подавляя их рост при меньших значениях рН, но не угнетают саму бифидофлору [31].

У новорожденных щенят, как и у других млекопитающих, содержание ЛЖК в меконии низкое (близко к таковому у безмикробных животных). Известно, что при содержании ЛЖК в фецес около 40...45 мкмоль/г количество условно-патогенных энтеро-бактерий может увеличиваться до 5 lg/r. При заселении кишечника лакто- и бифидофлорой с увеличением концентрации кислот вдвое этот показатель снижается до 2 lg/r [22]. Антимикробный эффект ЛЖК — один из важнейших механизмов снижения или предотвращения колонизации кишечника псевдомонадами, клебсиеллами, протеем, морганеллами, эшерихиями, представителями рода Clostridium. Ацидофильная палочка и бифидобактерии образуют разные антагонистические факторы, которые оказывают синергетическое действие. Из культуральной жидкости бифидобактерии выделены бактерицидные вещества, которые выдерживают нагревание при 100 °С в течение 30 мин, сохраняют активность при 4...5 °С в течение 3 мес, подавляя развитие многих энтеробак-терий, вибрионов, стрепто- и стафилококков. Выделен также нуклеотид с антагонистическим действием на метициллинустойчивые стафилококки [45].

Становление нормобиоза важно и для метаболизма желчных кислот. Их деконъюгация обусловлена ферментативной активностью нормальной микрофлоры. У образующихся свободных желчных кислот выражена антимикробная активность, их бактериостатические и бактерицидные концентрации создаются лишь при нормальном кишечном микробиоценозе. Благодаря нормальной микрофлоре увеличивается скорость обновления энтероцитов, усиливаются подвижность ворсинок и перистальтика, что способствует механическому удалению нежелательных бактерий и веществ из организма хозяина [3, 12, 23].

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что подобная динамика становления кишечного нормобиоза характерна и для новорожденных животных других видов, то есть ее можно считать биологической закономерностью. В сочетании с недостаточно выраженной иммунной реактивностью это способствует возникновению у новорожденных кишечных инфекций, токсикозов и другой патологии. Следует также отметить, что микрофлора кишечника насчитывает десятки видов, которые взаимодействуют между собой. Огромное влияние на биоценоз кишечника оказывают организм хозяина, характер кормления, состав молока матери в подсосный период: наличие в нем колостральных антител против возбудителей бактериальных и вирусных инфекций, лактоферрина, лизоцима, сиаловых кислот, содержащих олигосахариды, других ингредиентов [22].

Таким образом, становление нормальной флоры протекает постепенно и имеет очень большое значение для развития и здоровья щенков. Многолетний опыт работы свидетельствует о том, что для преодоления дисбактериоза новорожденных, раннего становления нормобиоза ЖКТ, профилактики бактериальных инфекций и лучшего развития помета следует назначать пробиотики — эффективные доноры лакто- и бифидофлоры не новорожденным щенкам, а самкам — начиная с периода беременности. Согласно результатам наших исследований у собак без признаков патологии, которые не подвергались существенным медикаментозным и оперативным воздействиям, относительно стабильный нормальный состав кишечной микрофлоры поддерживается в среднем до 5 лет (рис. 3). Более чем у 25 % исследованных собак г. Москвы число лакто- и бифидобактерий уменьшено. В возрасте старше 10 лет манифестная или субклиническая форма дисбактериоза какой-либо степени присутствовала у 100 % животных.

Очевидно, что при отсутствии необходимого количества нормальной микрофлоры в местах ее естественного обитания колонизационная резистентность снижается. Увеличивается число микроорганизмов, относящихся к условно-патогенным группам. Расширяется их спектр с возможной транслокацией из кишечника во внутренние органы и различные ткани, что нередко вызывает очаговые гнойно-воспалительные процессы и даже септицемию. Возрастает возможность колонизировать кожу и слизистые оболочки организма хозяина. Усиливаются процессы рекомбинантной изменчивости, к особо нежелательным последствиям которой следует отнести обмен генов антибиотикорезистентности и патогенности между бактериями. Изменяется (чаще всего расширяется) ареал существования аэробных и анаэробных бактерий, они появляются вне мест своего естественного обитания [37, 42, 54, 56, 64]. Длительное бактерионосительство патогенных антибиотикоустойчивых микроорганизмов, повышенная врожденная чувствительность к инфекционным агентам также могут быть следствием нарушения колонизационной резистентности. Исходя из этого, а также учитывая физиологическую значимость нормальной микрофлоры кишечника, очевидно, что, начиная с 5...6-летнего возраста даже клинически здоровым животным необходима профилактическая коррекция кишечной микрофлоры, чтобы увеличить количество основных физиологически значимых групп бактерий (в первую очередь бифидо- и лактобактерий). Старым собакам в обязательном порядке нужно давать доноров нормальной микрофлоры.

Глава 4

ПРИЧИНЫ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЙ ДИСБАКТЕРИОЗА

На состав микрофлоры ЖКТ и других естественных биотопов влияют многочисленные факторы: возраст, генетические особенности, физиологическое состояние организма хозяина, кормление, стрессы, агрессивные воздействия окружающей среды, различные заболевания, иммунодефицитные состояния, применение лекарственных препаратов. Поэтому дисбактериозы под воздействием перечисленных и при наличии других предрасполагающих факторов могут проявляться в любом возрасте.

Причины дисбактериоза. Одна из основных причин дисбактериоза у мелких домашних животных — нерациональное использование антибиотиков и других фармакологических средств.

Максимальное отрицательное воздействие на нормальную микрофлору ЖКТ оказывают антибактериальные препараты, особенно при введении их через ЖКТ. Но и при других способах поступления в организм (внутривенном, внутримышечном) многие препараты (в результате распределения и дальнейшего выведения через пищеварительный тракт) концентрируются в содержимом кишечника в больших количествах. Часто при дисбактериозах происходит избыточная пролиферация антибиотикорезистентных микроорганизмов, что усложняет лечение [6, 21]. Поражения в этом случае обычно не ограничиваются ЖКТ, а принимают генерализованные формы с вовлечением кожи, почек, сердца, легких и других органов [6, 8, 21, 54, 64].